EVALUATION. QCM
L'examen corrigé du module 'Techniques analyses' couvre la préparation des solutions chimique via les dilutions, la Spectrophotométrie (quantification via loi de Beer-Lambert (A = a x l x C), spectrophotométrie par mesure de l'absorbance/transmittance), et la Chromatographie (séparation par affinité fixe/mobile, ex: CCM, identification par Rf), des techniques fondamentales pour isoler, identifier et quantifier des molécules en biochimie. Application sur la quantification par spectrophotométrie des acides nucléiques (ADN, ARN)
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EXEMPLES DE QCMs du CONTROLE 'TECHNIQUES D'ANALYSES' :
QUESTION 1. En spectrophotométrie UV visible: Cocher la bonne réponse :
A- Les concentrations à analyser doivent être élevées.
B- L'absorbance est inversement proportionnelle à la concentration de la molécule étudiée.
C- Si on double la concentration de la solution, l'absorbance sera la même.
D- L'absorbance ne varie pas avec la longueur d'onde.
E- L'absorbance n'a pas d'unité.
QUESTION 2. Le coefficient d'absorption molaire a pour unité:
A- L. g-1.cm-1.
B- Cm.
C- L. ml-1.cm-1
D- L. mol-1.cm-1
E- N'a pas d'unité.
.........................................
Exercice 2. ENONCE: L'éosine B est un désinfectant en solution dans l'éthanol. L'absorbance d'une solution d'éosine de concentration C= 3,87 10-3 g/l placée dans une cuve de largeur L =1 cm, est égale à 0,59 à la longueur d'onde λ=530 nm.
QUESTION 6.
Déterminer la valeur de l'absorbance de la solution d'éosine mesurée à la même longueur d'onde mais dans une cuve de largeur L= 0,5 cm:
A- 0,59.
B- 2,95.
C- 1,18.
D- 0,295.
E- 1,935.
QUESTION 7. Calculer la concentration molaire de la solution d'éosine sachant que la masse molaire de l'éosine B est égale à 624 g/mol :
A- 0,062 10-3 M.
B- 6,2 10-8 M.
C- 6,2 10-6 M.
D- 24,14 10-1 M.
E- 2,414 M.
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EXEMPLES DE QCMs de L'EXAMEN TP CORRIGE du MODULE 'TECHNIQUES ANALYSES'. DILUTIONS, SPECTROPHOTOMETRIE et CHROMATOGRAPHIE (suite):
Exercice 3. ENONCE: Une colonne remplie de gel de sephadex G-100 est utilisée pour séparer 5 protéines : A (MM=400000 Da), B (MM=200000 Da), C (MM=90000 Da), D (MM= 75000 Da) et E (MM=20000 Da). Sachant que les limites d'exclusion du gel utilisé se situent entre 4000 et 150000 Da.
QUESTION 11.
Donner l'ordre d'élution des cinq protéines.:
A- E-D-C-B-A.
B- A-B-C-D-E.
C- (A+B)-(C+D)-E.
D- (A+B)-C-D-E.
E- A-B-(C+D)-E
QUESTION 12. Le volume mort de la colonne est :
A- Vm= Volume d'élution de la molécule E.
B- Vm= Volume d'élution de la molécule D.
C- Vm= Volume d'élution des molécules A.
D- Vm= Volume d'élution de la molécule C.
E- Impossible de le déterminer.
Exercice 4. ENONCE: On réalise une séparation sur chromatographie sur couche mince (CCM) d'une solution médicamenteuse X en utilisant la silice comme phase stationnaire et le dichlorométhane comme phase mobile. L'étude du chromatogramme obtenu a permis de repérer, après révélation, trois taches A, B et C, dont les Rf sont respectivement: 0,47; 0,24 et 0,72. Le front du solvant est situé à 8 cm de la ligne de dépôt.
QUESTION 13.
L'ordre de migration depuis la ligne de dépôt est :
A- A-B-C.
B- C-B-A.
C- A-C-B.
D- C-A-B.
E- B-A-C.
QUESTION 14. On a refait la séparation de la solution médicamenteuse X sur CCM dans les mêmes conditions chromatographiques. La hauteur du front de solvant obtenue dans ce cas est de 12 cm. Donner l'ordre de migration depuis la ligne de dépôt :
A- A-B-C.
B- C-B-A.
C- A-C-B.
D- C-A-B.
E- B-A-C.
QUESTION 15. Dans ce dernier cas le Rf de la substance B sera :
A- 0,12.
B- 0,24.
C- 0,48.
D- 0,06.
E- 0,6.
- Q11: D.
L'ordre d'élution des cinq protéines est (A+B)-C-D-E.
. L'ordre d'élution des protéines dans une chromatographie par tamisage moléculaire (filtration sur gel), telle qu'utilisant du Sephadex G-100, dépend de leur taille par rapport aux limites d'exclusion du gel.
Les principes clés sont :
Les protéines dont la masse moléculaire (MM) est supérieure à la limite d'exclusion supérieure sont exclues des pores du gel et éluées en premier, dans le volume mort.
Les protéines dont la MM est inférieure à la limite d'exclusion inférieure pénètrent entièrement dans les pores et éluent en dernier.
Les protéines dont la MM se situe entre les deux limites sont séparées en fonction de leur taille, les plus grandes éluant avant les plus petites.
Les limites d'exclusion du gel de Sephadex G-100 sont données entre 4 000 et 150 000 Da.
Analysons la taille des protéines :
A (400 000 Da) et B (200 000 Da) : Ces deux protéines ont une MM supérieure à la limite d'exclusion supérieure (150 000 Da). Elles seront donc toutes deux exclues du gel et élueront ensemble dans le volume mort, avant toutes les autres.
C (90 000 Da) et D (75 000 Da) : Ces protéines ont une MM comprise entre les limites d'exclusion (4 000 et 150 000 Da). Elles seront séparées en fonction de leur taille. C, étant plus grande que D, éluera avant D.
E (20 000 Da) : Cette protéine a une MM également comprise entre les limites, mais est la plus petite du groupe (hormis la considération pour le seuil inférieur). Elle éluera après C et D.
L'ordre d'élution sera donc : (A et B ensemble) - C - D - E.
Q12: C.
La réponse correcte est C- Vm= Volume d'élution des molécules A.
Le volume mort (Vm) d'une colonne de chromatographie par tamisage moléculaire est le volume de la phase mobile (éluant) qui se trouve dans les espaces entre les grains de gel. Ce volume est le premier à sortir de la colonne.
Les molécules qui sont trop grandes pour pénétrer dans les pores du gel (exclues) se déplacent uniquement dans ce volume mort et sont donc éluées en premier.
Ici, les limites d'exclusion du gel Sephadex G-100 sont de 4 000 à 150 000 Da.
La protéine A a une masse molaire (MM) de 400 000 Da.
Les protéines B, C, D et E ont des masses molaires inférieures à la limite supérieure d'exclusion (200 000 Da pour B, 90 000 Da pour C, 75 000 Da pour D et 20 000 Da pour E).
Par conséquent, seule la protéine A est exclue du gel. Elle sera éluée la première, et son volume d'élution correspondra au volume mort de la colonne.
Les protéines B, C, D et E pénétreront dans les pores du gel à des degrés divers (B moins que C, C moins que D, etc.) et seront éluées après la protéine A, dans l'ordre décroissant de leur masse molaire.
Q13: E.
L'ordre de migration depuis la ligne de dépôt est B-A-C, car le facteur de rétention (Rf) indique la distance parcourue par la substance par rapport au front du solvant ; ainsi, le composé avec le plus petit Rf (B=0,24) migre le moins, tandis que le composé avec le plus grand Rf (C=0,72) migre le plus loin, entraînant un ordre de migration croissant en Rf : B, A et C, soit B-A-C.
- Examen contrôle corrigé du module techniques analyses, FSSM, 2023
- Examen contrôle corrigé du module techniques analyses, FSSM, 2021
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