Chromatographie كروماتوغرافيا الألفة

Techniques de séparation basées sur la forme des molécules.
Chromatographie d'affinité, Affinity chromatography, كروماتوغرافيا الألفة

Chromatographie d'affinité
Affinity chromatography, كروماتوغرافيا الألفة


Le critère de la forme des molécules donne lieu aux techniques de chromatographie d'affinité (Affinity chromatography, كروماتوغرافيا الألفة).
Des complémentarités de forme peuvent exister entre plusieurs molécules. Il en résulte une affinité. C'est le cas des des affinités:
- Antigène-Anticorps
- Enzyme-Substrat ou Enzyme-Inhibiteur
- Recepteurs membranaires-Molécules
- Lectines-Glucides
- Acides nucléiques-Nucléoprotéines.


La chromatographie d'affinité repose sur la fixation spécifique et réversible d'une protéine à un ligand lié à la matrice. Le ligand peut soit se lier directement à la protéine d'intérêt ou à un tag qui est attaché de manière covalente à la protéine.

Chromatographie d'affinité كروماتوغرافيا الألفة

La chromatographie d'affinité est est une méthode de purification plus robuste. Généralement, elle est utilisée dans les premiers stades de purification. La purification par affinité peut être la seule étape de chromatographie nécessaire pour atteindre une pureté adéquate. e
Pour la chromatographie d'affinité, la phase stationnaire est réalisée sur une matrice inerte (agarose ou polyacrylamide) fixée de manière covalente à un ligand qui se lie spécifiquement à une protéine ou un groupe de protéines (voir figure).
Il existe deux types de chromatographie d'affinité dont la chromatographie d'affinité sélective et la chromatographie d'affinité non sélective.

- Chromatographie d'affinité sélective: un ligand spécifique d'une protéine ou d'un tag lié de manière covalente est utilisé.
- Chromatographie d'affinité non sélective
: comme la protéine A, G, L pour les immunoglobulines, ou de l'héparine pour des protéines liant l'ADN, ou la lectine pour les glycoprotéines, le ligand se lie à un groupe de protéines avec des capacités de liaison similaires.
En chromatographie d'affinité, les protéines sont chargées sur la colonne dans des conditions qui influencent la liaison entre la protéine (ou tag) et son ligand.
Le lavage de la protéine liée se fait dans des conditions ne perturaent pas l'interaction spécifique, mais pouvant perturber les interactions non spécifiques entre des protéines contaminantes et la phase stationnaire.
L'élution de la protéine liée est fait avec un tampon contenant une molécule concurrente ou des conditions perturbant les interactions protéine / protéine. La molécule concurrente se lie au ligand et déplace la protéine d'intérêt. La molécule concurrente est généralement éliminée de la protéine d'intérêt par un autre procédé chromatographique ou par une dialyse.
Exemple d'élutions de protéines liées lors d'une chromatographie d'affinité:

Protéine à purifier Ligand Eluée avec
Anticorps (classe-spécifique) Protéine A, G, ou L pH extrêmes
Anticorps (antigène-spécifique) peptide antigénique peptide libre
Protéine taguée avec le tag Poly histidine Ni2+ ou Co2+ Imidazole ou histidine libre
Protéine taguée avec l'épitope FLAG Anticorps anti- FLAG spécifique peptide FLAG ou pH faible
Protéine taguée avec le tag GST glutathion réduit glutathion libre
Protéine de liaison a l'ADN Héparine Force ionique élevée
Protéine taguée avec l'épitope Myc Anticorps anti-Myc spécifique faible pH

Plus de détails: https://www.labome.fr/method/Protein-Purification.html

Exemple d'application de la chromatographie d'affinité. Purification de protéines recombinantes (figure).

purification de protéines recombinantes par chromato d'affinité
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