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Elle comporte 4 étapes principales dont l'extraction des protéines, l'analyse par électrophorèse bidimensionnelle (isoélectrofocalisation selon pHi et SDS-PAGE) et l'identifications des protéines.
Liens utiles:
- Cours 'Protéomique et séparation des protéines par électrophorèse et isoélectrofocalisation
TRAVAUX DIRIGES
L'isolement et les analyses préliminaire d'une enzyme E (faisant partie des protéines) ont révélés sa présence sous deux formes E1 et E2 possédant respectivement les pHi 6,25 et 6,35.
Les deux formes
sont constituées chacune de 4 monomères appelés
A1, B1, C1 et D1 pour la forme E1 et A2, B2, C2 et D2 pour la forme
E2
Les masses moléculaires des monomères de types A, B, C
et D sont 60000, 30000, 20000 et 10000, respectivement. Seuls les monomères
de types B et C sont reliés par des ponts dissulfures. Les valeurs
des pHi de chaque monomère sont données dans le tableau
suivant :
Forme E1
|
Forme E2
|
||
Monomère | pHi | Monomère | pHi |
A1 B1 C1 D1 |
6,3 6,3 6,1 6,3 |
A2 B2 C2 D2 |
6,5 6,3 6,1 6,3 |
E2D N°1:
Première dimension : isoélectrofocalisation non dénaturante
Deuxième dimension : électrophorèse en présence
de SDS et de ß-mercaptoéthanol
E2D N°2 : Première dimension : isoélectrofocalisation
en présence d'urée 9M
Deuxième dimension : électrophorèse en présence
de SDS et de
ß-mercaptoéthanol
E2D N°3 : Première dimension : isoélectrofocalisation
en présence d'urée 9M et
de ß-mercaptoéthanol
Deuxième dimension : électrophorèse en présence
de SDS et de ß-mercaptoéthanol
Etablir les électrophorégrammes correspondant pour chacune des 3 éléctrophorèses bidimensionnelles. Annoter les polarités et les composants de chaque bande ou tache. Justifier vos réponses