TD 1. Exercice 1. ISOENZYMES DES PEROXYDASES CATHODIQUES DU PRUNIER ET DE L'ABRICOTIER
Une population de jeunes plants issus d'un croisement entre le prunier (Prunus salicina) et l'abricotier (Prunus armeniaca) a été étudiée pour son polymorphisme enzymatique montré par le système 'peroxydases cathodiques' (POX).
Pour cela, les feuilles prélevées de jeunes plants sont
broyées séparément dans 60 µl d'un tampon d'extraction
composé de 0,01 M Tris-HCl (pH 7,15), 3 mM DTE et 5% sucrose. Les
extraits sont soumis à une électrophorèse sur gel
d'amidon 11%. Le tampon du gel est constitué de 0,01 M d'Histidine
(PM Histidine = 155,2). Le tampon d'électrodes contient 0,135 M
Tris (préparé à partir d'une solution de Tris 0,5
M) et 0,043 M d'acide citrique (préparé à partir
d'une solution d'acide citrique 0,1 M). Le pH des deux tampons est ajusté
à 7,0 à l'aide d'une solution 1 M d'acide citrique.
Après révélation, le Zymogramme des POX obtenu montre
3 phénotypes électrophorétiques appelés arbitrairement
A, B et C (voir figure).
Le prunier et l'abricotier présentent respectivement
les phénotypes B et C.
1 / Rappeler brièvement,
le principe de l'analyse des isoenzymes par électrophorèse.
2 / Quelle peut être
la nature des isoenzymes codées par le gènes gouvernant
les
peroxydases cathodiques. Faire un inventaire des génotypes correspondant
à tous les phénotypes.
3 / Quel est l'intérêt
du système enzymatique des 'peroxydases cathodique' dans
cette étude.
4 / Comparer brièvement
les marqueurs isoenzymatiques et ceux basés sur la technique
PCR comme la méthode RAPD.
TD 1. Exercice 2. ISOENZYMES CHEZ LE PALMIER DATTIER
Trois populations F1 de jeunes plants de palmier dattier, Phoenix dactylifera L., sont obtenues à partir de 3 lots de graines provenant des croisements suivants :
Lot de graines (population F1) | Croisements | ||
Cultivar (femelle) | Mâle | Nombre de plants F1 | |
1 | X ? | M-2 | 128 |
2 | Aguellid (AGL) | M-1 | 164 |
3 | Iklane (IKL) | Y ? | 60 |
L'analyse par électrophorèse du polymorphisme enzymatique de la glutamate oxaloacétate transaminase (GOT) et des endopeptidases (ENP) a été réalisée à partir d'extraits enzymatiques de feuilles par électrophorèse sur gel de polyacrylamide utilisé comme support de migration. Cette analyse a permis d'obtenir 5 et 6 phénotypes électrophorétiques respectifs pour les deux enzymes. Deux loci GOT-2 et ENP sont ainsi mis en évidence. Les différents phénotypes obtenus (A-F) sont résumés dans les diagrammes ci dessous.
Les cultivars AGL et IKL (parents femelles) présentent, respectivement, des phénotypes E et D pour ENP et D et A pour GOT.
Les parents mâles M-1 et M-2 ont comme phénotypes respectifs
A et B pour ENP et E et A pour GOT.
Les fréquences des phénotypes isoenzymatiques au niveau
des trois populations de jeunes plants sont données dans le tableau
ci-dessous.
1. Quelle peut être la nature
des isoenzymes codées au niveau des loci GOT-2 et ENP.
2. Sur la base des 2 loci, faire un inventaire
des génotypes dans les 3 populations.
3. Sachant que les allèles
mis en jeu sont transmis selon la loi de Mendel, quels peuvent être
les génotypes du parent femelle X de la population 1 et du parent
mâle Y de la population 3.