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ELECTROPHORESE DES ISOENZYMES ET DETECTION PRECOCE DES HYBRIDES SOMATIQUES. CONTROLE TP


Un chercheur en Biotechnologie et amélioration des plantes projette de créer un hybride interspécifique alliant 2 traits agronomiques importants provenant de 2 espèces végétales (P-1 et P-2). Il a opté pour le suivi des obtentions de la fusion de protoplastes par une électrophorèse verticale des isoenzymes de 2 enzymes (E1 et E2) de pI approximatifs respectifs 6,5 et 8,0.
Protoplaste.Fusion
Des gels de polyacrylamide ont servi pour supports de migration. Ils sont préparés selon le tableau suivant.


  Gels de concentration (10 ml) Gels de séparation (15 ml)
Acrylamide-bis acrylamide 30:0,8% (ml) 1,87 6,25
Tris-HCl 3,0 M (pH 8,8) (ml) 0 1,87
Tris-HCl 0,5 M (pH 6,8) (ml) 2,50 0
Eau distillée (ml) 5,00 6,25
Persulfate d'ammonium 1,5% (ml) 0,60 0,60
TEMED (ml) 0,03 0,03

Après révélation des deux enzymes, les zymogrammes obtenus sont représentés par les 2 figures suivantes.
Electrophorèse. Isoenzymes
Fig.1
Electrophorèse. Isoenzymes
Fig.2


Questions


-1) Rappeler le(s) propriété(s) moléculaire(s) exploitée(s) dans la séparation des isoenzymes par électrophorèse.
2) Calculer les concentrations des gels de polyacrylamide en acrylamide, Tris-HCl (pH 8,8) et persulfate d'ammonium.
3) Quelle est l'enzyme susceptible d'être bien résolue sur le gel de polyacrylamide utilisé dans cette étude ? Justifier votre réponse. A quelle figure correspond son zymogramme ?
4) Quelle(s) est(sont) les amélioration(s) technique(s) que vous pouvez proposer pour la séparation de l'enzyme dont la résolution reste incomplète ?
5) Quelles peuvent être les raisons justifiant le choix par le chercheur des isoenzymes parmi les autres marqueurs de type RFLP et RAPD et AFLP.
6) Interpréter brièvement les zymogrammes des deux enzymes (loci, structure de l'enzyme, nombre d'allèles et génotypes).
7) A l'aide des figures 1 et 2, indiquer le(s) plant(s) qui montre(nt) le ou les hybrides somatiques.

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Electrophorèse, isoenzymes. TP Contrôle