chromatographie sur papier كروماتوغرافيا فوق الورق

chromatographie sur papier كروماتوغرافيا فوق الورق, Paper chromatography

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chromatographie sur papier كروماتوغرافيا فوق الورق, Paper chromatography

La chromatographie sur papier (كروماتوغرافيا فوق الورق) exploite la polarité des molécules (critère de polarité)
. Tout dépend du coefficient de partage des molécules selon leurs affinités, dans 2 solvants, dont l'un constitue la phase stationnaire et l'autre la phase mobile.
La phase stationnaire est fixée sur un support solide (papier, contenant un solvant polaire = eau) ou gel). Les composés plus solubles dans la phase aqueuse se déplacent lentement. Ceux qui sont solubles dans la phase organique migrent plus vite.
Le coefficient de partage (K) d'un composé entre les 2 phases correspond à:
K = (concentration dans la ph. stationnaire)/(concentration dans la ph. mobile).
La séparation des substances peut être aussi exprimée par l'indice Rf (reference front) correspondant (Rf = distance parcourue par une substance divisée par la distance parcourue par l'éluant. Le Rf est difficilement reproductible. C'est pour cela il est préférable de caractériser chaque substance par son indice Rx (Rx = distance parcourue par la substance divisée par la distance parcourue par un corps x pris comme référence).

ال كروماتوغرافيا فوق الورق تستعمل لفرز مركبات خليط معين (مثلا مجموعة من الأحماض الأمينية) حسب الفرق في تجادبيتهم مع الطور الثابث (الذي يتجلى في الماء داخل الورق) و الطور المتحرك الذي قد يشكلة خليط سائل من البوتانول و حمض الأسيتيك . في حالة فرز الأحماض الأمينية باستعمال هذا الطور المتحرك، فإن الأحماض الغير القطبية مثل اللوسين (Leu) و الإيزولوسين (Ile) و الفالين (Val)، ذات الدوبان المرتفع في هذا الطور المتحرك (أحماض أمينية نافرة للماء أو هيدروفوبية، ،ستندفع بسرعة عالية، مقارنة بالأحماض الأمينية القطبية ذات القابلية للماء (هيدروفيلية، و التي ستتأخر في هجرتها ( للمزيد من المعطيات حول الأحماض الأمينية، انظر الفقرة المتعلقة بالمواد الأولية لبناء الكائنات الحية).

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تطبيقيا تجرى الكروماتوغرافيا فوق الورق داخل إناء مغلق. بعد انتاه العزل و استظهار المركبات برش النينهيدرين (Ninhydrine) فوق الورق مع التسخين في حالة فرز الأحماض الأمينية. تقاس هجرة الجزيئات فوق وسط كروماتوغرافي متكون من الورق بتقدير المسافة النسبية للهجرة ( Rf ) للجزيئات(المسافة التي قطعها جزيئ ما مقسومة على المسافة التي قطعها الطور المتحرك), ومن ثم مقارنته مع عامل الإعاقة للمركب القياسي المؤشر (Témoin marqueur) و هو معروف الهوية

فصل الأحماض الأمينية بالكروماتوغرافيا فوق الورق
Séparation des acides aminés par chromatographie sur papier. TP S3

But Le but du travail pratique réside dans la séparation des acides aminés par chromatographie de partage sur papier.
Matériel et réactifs
- Cuve de chromatographie.
-Papier filtre Whatman N°1.
- Sèche cheuveux.
- Etuve à 80°C.
- Cinq pipettes correspondant aux solutions d'acides aminés et au mélange H.
- Quatres solutions étalons d'acides aminés correspondant à la leucine (Leu, L), proline (Pro, P), acide aspartique (Asp,D) et acide glutamique (Glu, E).
- Mélange inconnu de deux acides aminés (mélange H).
- Mélange de solvants n-butanol (3v), acide acétique (3v), eau distillée (1v).
- Solution de nynhydrine 0,3% préparée dans un mélange de n-butanol- acide acétique 19:1 (v/v).

Protocole expérimental
La séparation des acides aminés par chromatographie de partage est réalisée sur une feuille de papier Whatman N° 1 de dimensions 15 cm x 8 cm. Veuillez à ne pas toucher le centre du papier avec les doigts.
- A 1,5 cm du bord inférieur du papier, tracer une ligne droite à l'aide d'un crayon. Laisser 1 cm de chaque côté du trait et marquer sur la ligne 5 points équidistants (repères de dépôt) notés H, Leu, Pro, Asp et Glu (voir schéma).

A l'aide d'une pipette Pasteur, déposer au niveau des repères une goutte de chacune des 5 solutions correpondant au mélange H et aux quatre acides aminés Leu, Pro, Asp et Glu. Pour chaque dépôt, utiliser une pipette Pasteur appropriée.
- Sécher les dépôts au sèche-cheveux.
- A l'aide d'une éguille, faire un trou au bord supérieur du papier et y passer un fil de couture pour le suspendre dans la cuve de chromatographie.
- Introduire le papier dans la cuve de chromatographie sans qu'il touche le solvant. Fermer la cuve et laisser le papier se saturer de solvants pendant 10 minutes.
- Tremper le papier dans le mélange de solvant sur une hauteur de 1 cm.
- Laisser la migration jusquà 1 cm du bord supérieur du papier.
- Retirer le papier et marquer le front de migration à l'aide d'un crayon.
- Sécher complètement le papier à l'aide du sèche-cheveux.
- Sous la hotte, pulvériser la solution de ninhydrine sur le papier.
- Placer le papier 10 minutes dans une étuve à 80°C.
- Entourer les spots d'acides aminés avec un crayon.

QCM Chromatographie surpapier

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Exemple de chromatogramme TP (niveau S3)

Vidéo: chromatographie sur papier des acides aminés: Dépôt de différents acides aminés sur papier, emplacement du support dans la cuve de migration et chromatographie, révélation des acides amines par pulvérisation de la ninhydrine)

LIENS UTILES

- (gel exclusion chromatography, كروماتوغرافيا الإقصاء، كروماتوغرافيا التغلغل
- Chromatographie d'échange d'ions (ion exchange chromatography, كروماتوغرافيا التبادل الإيوني)
- Chromatographie d'affinité (Affinity chromatography, كروماتوغرافيا الألفة)
- Chromatographie d'interactions hydrophobes (hydrophobic interaction chromatography, كروماتوغرافياالتفاعل الهيدروفوبي)
- Chromatographie sur couche mince (CCM)
- Séparation des protéines (chromatographie, ..). Exercices
- Chromatographie, Electrophorèse. QCM
- Techniques en Biochimie. Préambule
- Polarité
- Forme
- Taille
- Ionicite
- Chromatographies

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