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Enzymologie. Examens

L'enzymologie est l'étude des mecanismes catalytiques (ordre de fixation des substrats et de libération des produits et détermination des paramètres cinétiques). Ci dessous des exemples d'études qui font l'objet d'examen


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Examen d'enzymologie (FSSM, 1e.session 2000-2001, durée: 2 heures, Coef. 1)


Enzymologie. Question 1 (12 points)

--> Voir Examen sur la chélatase

Enzymologie. Question 2 (8 points)

L'aspartate transcarbamylase est une enzyme qui catalyse la formation du carbamyl-aspartate à partir de l'aspartate et du carbamyl-phosphate.
L'enzyme, extraite d'E.Coli puis traitée par un réactif chimique (PCMB), est séparée en 2 sous-unités de poids moléculaire (PM) égal à 99000, chacune et 3 sous-unités de PM égal à 34000, chacune. Les différentes sous-unités peuvent être séparées par chromatographie sur une colonne de Séphadex G-50. L'étude de l'activité enzymatique avec différentes concentrations d'aspartate a montré que les premières fractions collectées en bas de la colonne, sont très actives et montrent une cinétique représentée par la courbe 1 de la figure 1 ci-contre. Les dernières fractions collectées restent inactives. Cependant le test de l'activité des premières fractions, préalablement mélangées avec les dernières fractions a permis d'obtenir une cinétique représentée dans la figure 1 par la courbe 2. D'autre part, l'effet du CTP sur l'activité de l'aspartate transcarbamylase (enzyme native) a été testé en présence de concentrations variables et fixes d'aspartate.

aspartate transcarbamylase. Cinétique

Les résultats obtenus sont représentés, respectivement, par la courbe 3 de la figure 1 et la figure 2 (concentration d'aspartate fixe).


Examen d'enzymologie(FSSM, Session 2, 1998-1999, durée: 2 heures, Coef. 1)


Enzymologie. Question 1 (10 points)

--> Examen sur La citrate synthétase

Enzymologie. Question 2 ( 4 points).

Les peroxydases du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) sont des enzymes catalysent d'oxydation des phénols (AH2) en présence du peroxyde d'hydrogène (H2O2). Le mécanisme de catalyse peut être représenté par le schéma de Cleland suivant. E' et E" sont deux formes transitoires de l'enzyme E.
Comment doit on prouver la mise en jeu d'un tel mécanisme pour les peroxydases du palmier dattier ?.

peroxydase

Enzymologie. Question 3 ( 6 points).

Répondre brièvement aux questions suivantes :
1/ En reproduisant le schéma suivant, spécifier les groupes chimiques libres (3'-OH, 5'-P,..) au niveau des sites indiqués par les flèches a, b et c lors de l'ouverture du DNA de la droite vers la gauche de la fourche de réplication (voir figure ci-dessous):
2/ Quel est le rôle du RNA dans la synthèse du DNA ?
3/ Quel serait l'effet d'une hélicase sur la vitesse et la fidélité de la réplication du DNA?
4/ Dans quel ordre ces enzymes réalisent elles la jonction de 2 fragments précurseurs de DNA (fragments d'Okazaki) ?, en partant du principe que les deux fragments sont déjà synthétisés.
a/ DNA polymérase I (activité exonucléasique 5' 3'), DNA polymérase I (polymérisation), DNA ligase.
b/ Primase, DNA polymérase I, DNA ligase.


Examen d'enzymologie (FSSM, 2 session 1996-97, durée: 2 heures, Coef. 1)


Enzymologie. Question 1 (12 points) --> Voir Examen sur le mécanisme catalytique de la phospholipase: contrôle S5 sur la phospholipase A2.

Enzymologie. Question 2 (8 points)

Répondre brièvement aux questions suivantes:
1. Quelles sont les formes d'enzymes sur lesquelles se fixent un inhibiteur compétitif et un inhibiteur mixte ?
2. Quel(s) inhibieur(s) entrainent l'augmentation de l'affinité de l'enzyme pour son substrat ?
3. Quels sont les mode d'inhibition par les produits de la réaction dans les mécanismes ping-pong et aléatoire?
4. Qu'est ce qu'une enzyme allostérique désensibilisée ?
5. Y'a-t-il un ou plusieurs sites de fixation des nucléotides sur une DNA polymérase ? Comment le prouvez vous ?
6. Quels sont les rôles des activités exonucléasiques 3' * 5' et 5' * 3', portées par les DNA polymérases des procaryotes ?
7. Quel est le rôle d'une primase ?
8. Quel est le ôle d'une RNase H ?


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